总RNA提取技术服务

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货号:实验5
商家:威斯腾生物
品牌名称: 威斯腾生物

总RNA提取(Trizol提取)实验步骤:

 

在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时,将存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase 的作用。

1. 提取组织RNA 时,每50~100mg 组织用1ml Trizol 试剂对组织进行裂解;提取细胞RNA 时,先离心沉淀细胞,每5-10 ╳106 个细胞加1ml Trizol 后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞;

2. 将上述组织或细胞的Trizol 裂解液转入EP 管中,在室温15~30C下放置5 分钟;

3. 在上述EP 管中,按照每1ml TRIZOL 加0.2ml 氯仿的量加入氯仿,盖上EP管盖子,在手中用力震荡15 秒,在室温下(15℃~30℃)放置2~3 分钟后, 12000g(2℃~8℃)离心15 分钟;

4. 取上层水相置于新EP 管中,按照每1ml TRIZOL 加0.5ml 异丙醇的量加入异丙醇,在室温下(15℃~30℃)放置10 分钟,12000g(2℃~8℃)离心10 分钟;

5. 弃上清, 按照每1ml TRIZOL 加1ml 75%乙醇进行洗涤, 涡旋混合, 7500g(2℃~8℃)离心5 分钟,弃上清;

6. 让沉淀的RNA 在室温下自然干燥;

7.用Rnase-free water 溶解RNA 沉淀。

 

实验周期:

大约一周,根据量的多少而有所不同。




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