Sigma推出在线基因编辑工具CRISPRs

2013/08/31 来源:Ebiotrade
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导读
近日,Sigma-Aldrich公司宣布推出能编辑哺乳动物基因组的在线工具CRISPRs,该工具利用可定制的RNA-核酸酶复合物来实现基因组特定位点的编辑,这让研究人员以更快、更经济的方式筛选目的基因,并在鉴定重要靶点之后通过超特异的CompoZr ZFN 验证生物学上相关突变。

Sigma-Aldrich公司近日宣布推出Sigma CRISPRs,一款经济的哺乳动物基因组编辑工具,适合筛选和探索性研究。这是继锌指核酸酶(ZFN)以来,Sigma推出的第二款基因组编辑工具。


认识CRISPR原理

CRISPR指的是规律成簇的间隔短回文重复(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)。CRISPR/Cas是在大多数细菌和古细菌中发现的一种天然免疫系统,可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。Sigma CRISPRs利用可定制的RNA-核酸酶复合物来实现哺乳动物基因组特定位点的编辑。

在细菌中,来自入侵病毒的短DNA序列(间隔区)被掺入CRISPR位点,充当之前感染的“记忆”。再次感染引发互补的成熟CRISPR RNA(crRNA)找到匹配的序列,为CRISPR相关(Cas)核酸酶在特定DNA序列切割双链提供了特异性。


Cas9是由crRNA和tracrRNA(反式激活crRNA)引导、切割特定DNA序列的核酸酶。引导RNA(gRNA)可设计成包含发夹结构,以模拟tracrRNA-crRNA复合物。结合特异性是根据gRNA和三核苷酸NGG序列(protospacer adjacent motif,PAM)。对于位点特异的编辑,CRISPR/Cas9系统至少需要Cas9核酸酶和gRNA。

Sigma公司提供的CRISPRs在线服务工具

Sigma CRISPRs以单个质粒载体提供,其中包含GFP,可快速富集编辑过的细胞。当然,您也可以利用专门的生物信息学工具在线定制(www.sigma.com/crisprs)。


Sigma独有的在线设计工具让用户可根据CRISPR/Cas靶定的要求,识别人、小鼠和大鼠外显子中的最佳靶位点。它能够自动应用CRISPR/Cas最佳设计实践,包括靶位点与基因组中其他位点至少要求3个碱基对不匹配,从而最大限度减少了脱靶效应。

“Sigma在2008年开发出CompoZr ZFN技术,如今ZFN已成为基因组编辑的金标准。我们利用这一专长创造出Sigma CRISPRs,它让研究人员以更快、更经济的方式筛选目的基因。在利用Sigma CRISPRs 鉴定出重要靶点之后,可通过超特异的CompoZr ZFNs 来验证生物学上相关的突变,以减少潜在的脱靶,”Sigma Life Science功能基因组学市场部经理Shawn Shafer博士谈道。

Sigma-Aldrich研发部门的首席研究员Greg Davis博士认为:“操控哺乳动物基因组的能力对生物学而言是革命性的。Sigma CRISPR/Cas技术作为一款早期、经济的基因编辑工具,为开发和使用带来巨大希望。”

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